現(xiàn)在流行兩種主要的液相色譜分析柱的式樣，關(guān)鍵部件卡套有些不同。一種式樣是螺母、卡套全套在柱管上，分配器和燒結(jié)過(guò)濾板按順序放在尾部接頭內(nèi)。擰緊螺母和尾部接頭，卡套一次成型緊緊咬住柱管外壁，起到很好的密封作用。分配器使得高壓流動(dòng)相不集中在一點(diǎn)沖擊柱床，又能把由流動(dòng)相帶來(lái)的樣品分散到柱頭上均勻分離，形成對(duì)稱(chēng)的色譜峰。燒結(jié)過(guò)濾板的孔徑<5微米，除了能緩和高壓流動(dòng)相對(duì)固定相的沖擊，也擋住了污染物進(jìn)入色譜柱柱頭。
液相色譜分析柱在使用前，需要進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是好的條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。具體有以下3點(diǎn)：
1、樣品的前處理：
a、至好使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制：
a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
3、流動(dòng)相流速的選擇：
因液相色譜分析柱是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求更好的柱效，使用合適流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
在使用液相色譜分析柱時(shí)，多注意使用注意事項(xiàng)可以避免一些不必要的麻煩，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)人員的工作效率，比較主要的有以下6點(diǎn)：
1、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
2、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
3、保存色譜柱
應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
4、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此，在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
5、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成
特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?br />
6、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖
只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
